文章目录

1 材料与方法

1.1 质粒、菌株及病毒

1.2 主要试剂及仪器

1.3 实验动物

1.4 重组表达质粒的构建

1.5 质粒的转化

1.6 目的蛋白的诱导表达

1.7高表达克隆的筛选

1.8 5 L发酵罐发酵

1.9 EV71VLPs的分离纯化

1.1 0 纯化EV71 VLPs的透射电镜观察

1.11纯化EV71 VLPs的动态光散射分析

1.12动物分组及免疫

1.13免疫小鼠血清抗体水平的检测

1.14统计学分析

2 结果

2.1 重组表达质粒的酶切鉴定

2.2 高表达克隆的筛选

2.3 纯化EV71 VLPs的鉴定

    2.3.1 SDS-PAGE分析

    2.3.2 透射电镜观察

    2.3.3 动态光散射分析

2.4 免疫小鼠血清的抗体水平

3 讨论

文章摘要:目的利用巴斯德毕赤酵母制备重组人肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）病毒样颗粒（virus-like particles,VLPs）,并评价其免疫原性。方法将EV71的P1和3CD基因插入巴斯德毕赤酵母基因组中,构建EV71 VLPs表达质粒,转化巴斯德毕赤酵母KM71感受态细胞,Western blot法筛选高表达克隆,5 L发酵罐发酵,阳离子交换层析和凝胶体积排阻层析纯化EV71 VLPs。用不同剂量（0.05、0.5、5μg）的纯化EV71 VLPs免疫小鼠,ELISA法检测小鼠血清抗体滴度。结果 EV71 VLPs表达质粒经双酶切鉴定证明构建正确。纯化的EV71 VLPs在电镜下可见大小均一、直径约为30 nm的典型VLPs;动态光散射分析显示,EV71 VLPs的流体力学直径为35.82 nm;经0.05、0.5和5μg EV71 VLPs免疫后,小鼠血清ELISA抗体的几何平均滴度（geometric mean titer,GMT）分别为119、800和3 200,差异有统计学意义（P <0.01）。结论 EV71 VLPs在巴斯德毕赤酵母中成功表达,且具有良好的免疫原性。

文章关键词:

论文DOI:10.13200/j.cnki.cjb.003485

论文分类号:R392-33